穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選 服務(wù)介紹

穩(wěn)定細(xì)胞系是指將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到染色體中，用載體中所含的抗性標(biāo)志進(jìn)行篩選，篩選得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白，或者穩(wěn)定表達(dá)沉默特定基因的細(xì)胞株。常用物理方法（電轉(zhuǎn)）、化學(xué)方法（脂質(zhì)體等）、生物方法（病毒）。

穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選  實(shí)驗(yàn)原理

外源基因在細(xì)胞中的表達(dá)可分為兩大類，一類是瞬時表達(dá)，一類是穩(wěn)定表達(dá)（又叫表達(dá)）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達(dá)到高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上，使宿主細(xì)胞可長期表達(dá)目的基因。建立穩(wěn)定細(xì)胞株，一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選。常用的抗性標(biāo)記基因有潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）和嘌呤霉素（puromycin）。

實(shí)驗(yàn)流程：

1、載體構(gòu)建（表達(dá)質(zhì)粒載體、病毒載體）；

2、轉(zhuǎn)染/感染；

3、目的蛋白初步檢測；

4、抗生素篩選；

5、目的蛋白再次檢測（定性/半定量）；

6、單克隆細(xì)胞株穩(wěn)定性檢測。

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實(shí)驗(yàn)周期：大約3-4月左右，具體需要根據(jù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。